Высокоспецифичные методы определения креатинина - статьи - Каталог статей - Клинико - диагностическая лаборатория
Четверг, 08.12.2016, 07:57
| RSS
Главная | Каталог статей
Меню сайта
Категории раздела
статьи [155]
Нормативные документы Украины [45]
Нормативные документы Казахстана [4]
Накази Мінпраці та соцполітики [3]
Патенты [68]
Нормативные документы Российской Федерации [34]
клінічні протоколи лікування хвороб [19]
авторефераты диссертаций [4]
Нормативные документы Беларуси [21]
Нормативные документы СССР [19]
Полезные ресурсы
Мир лаборатории
Медицинский форум
МедЛабДиагностика
Туберкулез предстательной железы
Каталоги
Яндекс цитирования Рейтинг@Mail.ru
Статистика
Клиническая лабораторная диагностика
Главная » Статьи » статьи

Высокоспецифичные методы определения креатинина
Высокоспецифичные методы определения креатинина
Проблемы, связанные с невысокой специфичностью реакции Яффе, побудили к поиску более специфичных методов. Наибольший интерес представляют ферментативные или частично ферментативные методы с использованием: (1) креатининазы (КФ 3.5.4.21), также называемой креатининиминогидролазой или деиминазой, катализирующей расщепление креатинина до иона аммония и N-метилгидантоина и (2) креатинингидролазы (КФ 3.5.2.10), также называемой креатининамидогидролазой, катализирующей гидролиз креатинина до креатина (рис. 3).


В частично ферментативных, ранних вариантах автоматизированных и неавтоматизированных методов, использовали эти ферменты, или в сочетании, или раздельно. Их использовали для разрушения креатинина и определения разницы между общим количеством Яффе-реагирующих хромогенов (до добавления фермента) и остающихся в среде «некреатининовых» Яффе-реагирующих хромогенов (после добавления фермента). Данные методы позволяют оценить истинное содержание креатинина в материале.

Для определения креатинина использовали иммобилизированный фермент креатининазу в сочетании с ион-селективным электродом, чувствительным к ионам аммония. Поскольку методы, основанные на данной реакции, чувствительны как к эндогенному аммиаку и креатинину, так и к аммиаку в окружающей среде и реактивах, потребовалось введение дополнительных реакций, позволяющих вывести из реакции ионы аммония и поддерживать стабильный уровень кофермента НАДФН2 .

Был предложен полностью ферментативный метод, в котором креатинин гидролизуют до креатина, который определяют в креатинкиназной реакции (рис. 4).


Скорость индикаторной реакции в данной сопряженной системе ферментов контролируется спектрофотометрически при длине волны 340 нм или в равновесном, или кинетическом варианте. Метод используют как для неавтоматизированного определения, так и для определения с помощью автоанализаторов [17].

Для устранения влияния аммиака при определении креатинина используют методы с использованием креатининамидогидролазы для превращения креатинина в креатин. Креатин превращают в саркозин, который окисляется саркозиноксидазой до глицина, формальдегида и перекиси водорода (рис. 4). Содержание перекиси водорода определяют количественно в пероксидазной реакции, интенсивность окраски среды зависит от концентрации креатинина в образце [18–20].


Референтный метод для определения креатинина в сыворотке включает массспектрометрию с изотопным разведением. В данном методе применяют ионообенную ВЭЖХ с фотометрией при 234 нм [21].

Количественное определение креатинина может быть проведено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии [22].

Другие методы определения креатинина включают реакцию креатинина с 3,5-динитробензойной кислотой (ДНБК) или ее производными [23], 1,4-нафтохинон-2-сульфонатом или o-нитробензальдегидом [24].

Реакция креатинина с ДНБК была использована в технологии «сухой» химии. В этом методе креатинин реагирует с ДНБК с образованием окрашенного комплекса. Реакция оценивается с помощью отражательной фотометрии при 560 нм [25] .

Зависимость референтных интервалов от метода определения креатинина
Уровень креатинина сыворотки человека зависит от двух основных факторов: скорости образования и скорости выведения. Поскольку источником креатинина в сыворотке является креатин и креатинфосфат мышечной ткани, большая мышечная масса сопровождается более высоким содержанием креатинина в сыворотке. На практике эти различия выявляют при сравнении результатов определения креатинина у мужчин, женщин и детей. Индивидуальные колебания уровня креатинина сыворотки у здоровых взрослых располагаются между 4 и 6 % [26].

Второй, и намного более существенный, фактор, отвечающий за уровень креатинина в сыворотке — скорость его выделения почками. Для оценки почечной функции определение клиренса креатинина является более чувствительным показателем, чем уровень креатинина в сыворотке. Определение креатинина в моче проводят для определения клиренса креатинина или для оценки полноты собирания суточного объема мочи.

В ряде исследований было обнаружено существенное колебание количества креатинина, экскретируемого почками ежедневно. В частности, внутрииндивидуальный коэффициент вариации может достигать 10 % [27] .

Выделение креатинина с мочой пропорционально мышечной массе, при расчете на килограмм мышечной массы экскретируется около 0,5 ммоль креатинина. Характер питания, объем мочи и физическая активность не сказываются существенно на уровне креатинина сыворотки. Физическая нагрузка незначительно увеличивает выведение креатинина с мочой, а у людей с недостатком белка в пище выведение креатинина уменьшается [28]. Колебание количества выделенного с мочой креатинина может быть связано с экзогенным креатинином, попадающим с пищей. Этим объясняют колебания величины клиренса креатинина от 15 до 20 % у одного и того же человека.

Выделение креатинина уменьшается с возрастом. Величина клиренса у пожилых увеличивается незначительно, поскольку уменьшение выделения креатинина с мочой частично компенсируется снижением образования креатинина в результате уменьшения мышечной массы.

Поскольку большинство современных методов определения креатинина в плазме крови, основанных на реакции Яффе, обладают различной специфичностью, референтные интервалы зависят от того, насколько правильно был определен уровень креатинина.

При использовании более специфичных (ферментативных) методов определения креатинина в плазме референтные интервалы обычно на 10–25 ммоль/л (0,1–0,3 мг/100мл) ниже по сравнению с обычно используемыми методами.

Референтные интервалы [29]
При использовании реакции Яффе:
Сыворотка (плазма):
мужчины — 62–115 мкмоль/л (0,7-1,2 мг/100мл);
женщины — 53–97 мкмоль/л (0,6-1,1 мг/100мл).

Выделение креатинина с мочой:
мужчины — 124–230 мг/кг/сутки (14–26 мг/кг/сутки);
женщины — 97–177 ммоль/кг/сутки (11–20 мг/кг/сутки).

При использовании ферментативного метода:
мужчины — 55–96 мкмоль/л (0,62–1,1 мг/100мл);
женщины — 40–66 мкмоль/л (0,45–0,75 мг/100мл).

Дети до 12 лет [30]:
сыворотка — 22–75 мкмол$ь/л (0,25 –0,85 мг/100 мл);
моча — (0,5 ммоль/л)/кг мышечной ткани (0,057 г).
Просмотров: 2143
Холодняк Любовь Владимировна
Хостинг от uCoz@Холодняк Любовь Владимировна